操作干货之设备排气 | 思拓凡学堂中国官网

在层析纯化实验中，我们的缓冲液、样品以及设备中都不能有气泡，否则可能会影响实验进程以及层析图谱。那么实验开始前，我们需要做哪些操作以确保实验设备中的气泡被排除出去了呢？

今天，Cytiva带你一起走进ÄKTA，深度了解设备排气那些事。

在用ÄKTA层析系统 进行正式实验前，我们可以使用Pump wash命令进行泵冲洗及手动泵头排气对设备进行排气操作。

使用Pump wash命令进行泵冲洗

将本次实验所需要用到的所有的缓冲液管道(如A1、B1、S1等)全部插入到去离子水中：

在 System Control 窗口点击 Manual >Execute Manual Instructions ，在弹出的Manual instruction 窗口中选择Pumps and pressures> Pump wash ，分别选择需要泵洗Inlet ，点击Insert ，将所有需要泵洗的入口的命令均Inlet 之后，点击 Execute ，系统泵即按照Inlet 插入的顺序自动开始冲洗。

冲洗流速分别为20 mL/min（25系统）、75 mL/min（150系统），冲洗1 min自动停止，入口维持所选冲洗的入口（如选择A2 入口进行pump wash ，命令结束后，Inlet A 维持A2 入口）。

图1：UNICORN中Pump wash界面

泵头手动排气

在系统进行Pump wash命令时需观察入口管道中是否有气泡、如有气泡是否在向前移动，或观察W1出口是否有液体流出。如发现管道中有较长段气泡无法排除或W1出口无液体流出，需要在Pump wash结束后对相应的Inlet进行泵头手动排气。具体操作方法为：

将注射器连接到需排气泵头的蝴蝶阀上（下图圈出），确保注射器与蝴蝶阀连接紧密。

逆时针旋转四分之三圈打开清洗阀，将液体缓慢吸入注射器，直到液体到达泵头。

图2：ÄKTA系统手动排气示意图

注意：

1、如果对A泵进行手动排气，A泵的两个泵头需要依次进行手动排气过程，B泵及S泵同理。

2、A泵进行手动排气时，系统默认走Inlet A1,如需对A2进行手动排气，需要点击 Manual > Execute Manual Instructions > Flow Path > Inlet A将入口改为A2。B泵及S泵同理。

Pump wash和System wash的区别

细心的你可能会发现，在手动命令中，除了Pump wash，还有一个跟它很相似的命令System wash。同样都是wash，它们有什么区别呢？我们要如何选择呢？

执行Pump wash命令时系统流路示意图如下图。此时废液从进样阀的W1出口排出。且在执行该命令时需手动选择某个缓冲液入口管进行A或B泵的Pump wash操作，A、B泵不能同时开启。

图3：系统流路示意图（Pump wash-A1）

执行System wash命令时有两个选项（如下图）。如果此时系统正在运行中，执行该命令后会继续使用当前缓冲液比例进行系统清洗（即A、B泵可以同时开启）；如果系统没有运行，默认使用A1入口进行系统清洗。

图4：手动命令设置（System wash）

选择Injection valve选项时与Pump wash命令相同，选择Oulet valve选项则如下图所示。此时废液会从出口阀的废液出口排出。（ÄKTA pure系统需要配置柱位阀才可以选择从出口阀排出废液）。冲洗流速分别为20 mL/min（25系统）、75 mL/min（150系统），默认分别冲洗15 mL（25系统）、50 mL（150系统）自动停止，恢复之前设备运行状态。

图5：系统流路示意图（System wash-A1-Out）

总结一下两者的区别

Pump wash：清洗时，只能单独一个泵工作，需要手动选择清洗管路，废液出口只能是进样阀的W1，清洗完毕后保持入口选项，例如A1运行，插入入口A2的Pump wash命令，A2入口清洗后，将保留A2入口选择，继续运行。

System wash： 清洗时，可以双泵齐开，以当前的AB比例进行系统冲洗，废液口可以选择进样阀的W1或者出口阀的废液口（ÄKTA pure系统需要配置柱位阀），清洗完成后，不改变AB入口及比例。

泵后腔中气泡的处理

泵后腔中充满20%的乙醇，一方面起到润滑柱塞杆的作用，另一方面可以抑制泵后腔长菌。

泵后的橡胶软管中有气泡对实验没有影响，但需要确保系统泵运行起来之后，泵后润洗系统能够正常运转，若泵后润洗系统无法正常运转，可用注射器对泵后润洗系统进行抽气（如图6）（注意此时请保证储液管中有足够的20%乙醇，抽气时放在储液管中的两端只有一端可以抽的动）。

图6：泵后腔软管排气

鉴定系统泵运行方法：

系统泵运行起来之后，ÄKTA pure上距离50 mL管最近的泵头顶端回到50 mL管的软管，ÄKTA avant中50 mL离心管中较短的软管，可以滴液体。若相应的软管没有在滴液体，说明泵后润洗系统没有正常运转。