抗体浓度定量新利器 — Biacore™Series S Sensor Chip PrismA重磅来袭!

Fig 1. Biacore™ Series S Sensor Chip PrismA suitable for use with Biacore™ systems.

得益于该重组Protein A的优异特性,使得PrismA芯片具有以下特点(Fig 3):
- 能够结合来自多种哺乳动物物种的各类抗体,例如人IgG1、IgG2和IgG4亚类;
- 与Protein A芯片相比,PrismA芯片增强了位于可变重链上的 VH3 序列的结合亲和力;
- 确保了检测的可靠性,每个通道可重复的高亲和力捕获高达上千个循环;
- 数据重复性更高,因为PrismA 芯片是在高度控制条件下开发和制造的。

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溶于缓冲液中IgG1单克隆抗体浓度定量的检测限LOD与定量限LOQ

Fig 4. LOD and LOQ for 30 s contact time (A) and 180 s contact time (B).Plots show the response levels of blanks (i.e., buffer injections) and the lowest concentration calibration and control sample points. LOD and LOQ response levels are indicated with dashed lines. The calibration curve fits are shown as solid lines.
02
溶于缓冲液中IgG1单克隆抗体浓度定量的动态范围和重复性
PrismA芯片针对于溶于缓冲溶液中的纯化抗体样品的动态范围可达0.1 μg/mL至 1 mg/mL。针对于IgG1单克隆抗体,使用Biacore 8K+在相同浓度间隔,不同进样时间的条件下,标准曲线重复性依旧非常优异(Fig 5)。

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确定适宜的细胞株上清IgG浓度定量稀释倍数
针对细胞株上清这类高背景样品,使用缓冲液进行适宜的倍比稀释能够有效降低非特异性结合,提升数据准确性。使用PrismA芯片针对于培养10天的细胞株上清使用缓冲液进行1:10, 1:100, 1:1000倍比稀释,随后对细胞株上清中IgG进行浓度定量,结果可见,1:100的稀释倍数相较于1:10更佳。

PrismA芯片在浓度定量时超高的稳定性
使用PrismA芯片,在芯片同一通道上进行总共200次循环检测,每隔100次进行标准曲线验证,实验数据显示即使芯片经过200循环检测,标准曲线依旧保持非常高的重复性(Fig 8)。

Fig 8. Calibration curves run at start (Calibration 1), middle (Calibration 2),and end (Calibration 3) ofthe assay (i.e., every 100 cycles), split into (A) a lower(0.1 to 1.6 g/mL) and (B) a higher (3.1 to 100 μg/mL) range.
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