精华纯享：ADC指导原则之活性检测

自DS-8201展示其惊世骇俗的临床疗效后，抗体偶联药物 (ADC) 引发全球研发的浪潮。为规范和指导ADC产品的研发与申报，CDE发布《抗体偶联药物药学研究与评价技术指导原则》。此原则的颁布，为ADC在研发、生产、质控等诸多环节给予了明确指导。

图1：公告发布截图

精读ADC指导原则可以发现，针对ADC活性检测主要集中于三大方面：

1、产品设计方面：需从靶向性、在体内循环中的稳定性以及生物学活性等多个方面进行综合考量。

2、生产工艺方面：需关注由于小分子特性以及生产工艺因素而引起的质量属性变化（如生物学活性）。

3、质量研究和控制方面：将结构特性、纯度和杂质、异质性、生物学活性、有效载荷分布等关键质量属性进行充分表征。

针对于活性检测，此指导原则从ADC各构成要素及要素组合互相影响的角度给予简要说明。

1、对于光敏感性的小分子，在特定光照波段或高强度照射下会发生化学结构的变化，而这种化学结构变化可能会影响ADC产品的质量属性（如生物学活性等）。

2、对于含有多手性中心的连接子和有效载荷，应关注手性中心是否会影响ADC产品的生物学活性。

1、原则上，裸抗的质量研究要求和抗体药物的要求基本一致。

2、同时若有Fc效应功能，应基于抗体的类型、结构改造等开展Fc功能研究。

1、ADC产品由于偶联引起的关键质量属性，应从结构确证、理化性质、生物学活性和杂质研究等角度进行全面的表征，并结合对裸抗的特性分析充分了解偶联前后的相关特性变化（如抗原结合活性、Fc功能活性等）。

2、应采用适当的分析方法（如ELISA、表面等离子体共振法或生物层干涉法等）评估与目标抗原的结合活性。若Fc介导的效应子功能可能影响药物的有效性，或表现出效应子结合功能相关的非特异性毒性，则应进行相应的生物学活性评估。

3、对于 ADC 原液生产工艺放大和转移过程，需特别关注放大和转移前后关键质量属性（如生物学活）；早期开发阶段，可基于有限批次的研究数据进行可比性研究，但应关注安全性和有效性相关的质量属性（如生物学活性等）。

3、质量标准中的检验项目通常是在充分的质量研究基础上确定的，在保证产品安全有效方面有重要影响的质量属性。ADC原液和制剂一般包括性状（如外观、颜色）、鉴别、 DAR值和药物载量分布、纯度和杂质、生物学活性、含量、一般检项等。

作为分子互作检测的金标准技术，Biacore在ADC活性检测具备完整的解决方案。与此次指导原则相呼应，Biacore从靶点结合活性、Fc受体结合活性、偶联效应、DAR值影响、生产质控等方面给予用户成熟的检测方法，助力ADC药物成功上市。接下来，简举几个案例，以飨读者。

Alfasigma公司将Trastuzumab与HDAC抑制剂偶联，分别得到ADC候选分子ST8176AA1与ST8178AA1，并借助Biacore完成了不同ADC、Trastuzumab与HER2受体的动力学表征。结果表明：相较独立的抗体 (Trastuzumab) ，ST8176AA1与靶蛋白的亲和力并未明显减弱。

图2：Trastuzumab, ST8176AA1, ST8178AA1与HER2 receptor的动力学表征

斯旺西大学的研究人员使用Biacore检测了可剪切/不可剪切Linker对ADC与靶点结合活性的影响。观察Kon/Koff图可以看出，RBGO1-ADC相较RBGO1裸抗，无论是哪一种Linker，RBGO1-ADC与抗原结合的动力学与亲和力均未发生明显变化。而带有不同Linker的RBGO3-ADC与裸抗相比，其与抗原的结合速率明显降低。

图3：不同Linker对RBGO1-ADC、RBGO3-ADC与抗原结合活性的影响

斯旺西大学的研究人员利用Biacore检测了不同DAR对ADC与抗原结合活性的影响。研究结果表明，DAR分别为1.5和3.5的ADC与裸抗相比，它们与抗原结合的亲和力并未发生明显变化，说明这些不同数量的DAR并不影响ADC与抗原的结合。

图4：不同DAR对RBGO1-ADC、RBGO3-ADC与靶点结合活性的影响

中国食品药品检定研究院以T-DM1为目标产品，以Biacore为基础建立了ADC的质控分析方法。研究人员使用CM5芯片与抗人Fc抗体自制捕获芯片，“抓取”不同批次的T-DM1或参照品，采用单循环动力学方法测定其与HER2的亲和力。结果显示：测定T-DM1参比品、样品和裸抗的结合常数，发现两者之间的结合常数非常接近。样品经重复检测3次，测定的KD平均值为1.03±0.02 nM，RSD也控制在5%以内。

图5：中检院单抗室借助Biacore开发ADC的质控方法