FDA：基于SPR建立流感中和抗体筛选的方法

流感的季节性反复使人们更加关注为重症患者输注异源特异性抗体的潜在益处。2023年美国FDA生物制品评价与研究中心 (Center for Biologics Evaluation and Research, CBER) 发表了题为“Method for screening influenza neutralizing antibodies in crude human plasma and its derivatives using SPR”的文章，介绍了采用Biacore评估人血浆样品和IGIV产品（intravenous immunoglobulin，静脉注射人免疫球蛋白）中特异性抗流感病毒抗体的方法（图1）。

图1：FDA发表文章截图

FDA指出SPR提供了一种高通量、快速、准确、可靠的方法，可以替代传统手段如HAI血凝实验和微量中和实验，用于从大量供体血浆中筛选高中和活性的样本来生产高效的免疫球蛋白。下面我们就来详细看看FDA是如何用Biacore开发这一新方法的。

图2：NR-44074特异性结合α2,6唾液酸受体

此外研究人员通过多次结合/再生循环评估芯片表面的稳定性，结果显示结合响应值的差异性为0.2%（图3），表明这一实验方案是稳定可靠的。

图3：评估芯片表面稳定性

如图4a所示，纯化的小鼠腹水来源针对H1的单克隆抗体NR-28666按照1:8000稀释之后完全抑制了H1凝集素与α2,6唾液酸受体的结合（图4a，红色传感线）。使用感染H1N1的动物抗血清也得到了相似的结果（图4a，绿色传感线），只是抑制效率不如单克隆抗体。作为阴性对照的Anti-H5单克隆抗体2728未展现出这一抑制作用（图4a，黑色传感线）

实验中还测试了WHO作为参照的针对每年流行的流感亚型的兔抗血清，结果显示只有anti-H1-like A/California/07/2009的抗血清（图4b，红色传感线）表现出对A/California/07/2009 or A/California/04/2009 rHA结合的抑制，其他亚型的抗血清与H1凝集素预混后并未影响rHA的结合（图4b）。

图4：单克隆抗体和免疫血清抑制能力实验

血浆样品按照1:1的比例与rHA预混后上样，通过与对照样品（未感染的正常人类血浆）比较用下降的信号值比例计算抑制效果。Biacore得到的结果与HAI血凝实验一致（图5b），HAI结果中显示含有大量特异性抗体的血浆样本在Biacore实验中几乎完全抑制了HA与受体的结合（图5a○），而中等滴度的血浆样本显示出对结合的部分抑制（图5a▲），含有微量抗体的样本抑制能力小于5%（图5a□）。后续使用病毒粒子替代rHA重复了该实验，也得到了同样的结果。

图5：血浆样品的Biacore抑制实验

图6：Biacore竞争法检测抗体含量

图7：SPR方法评估不同IGIV产品中流感抗体的含量

研究中使用B/Victoria/504/2000和A/California/04/2009 H1N1流感病毒的完整病毒颗粒重复了SPR实验。Biacore结果显示B/Victoria/504/2000和A/California/04/2009 H1N1病毒与α2,3及 α2,6受体均有结合，但显示出信号值和动力学速率的差异（图8a/b）。抑制实验中也表现出明显的浓度依赖的抑制作用（图8c/d）。

图8：流感病毒粒子的结合特异性及抑制实验