收藏
询价没有通用亲和填料怎么办？Cytiva预活化填料定制专属方案！
但这些产品解决的是通用标签或通用识别问题。而真正头疼的，往往是那些“没有标准答案”的课题：没有标签的天然蛋白、特定抗原、多抗血清、自制抗体、功能肽、小分子探针、糖类配基、需要固定化的酶……
这个时候，一种适配广泛的解法应运而生：预活化填料。预活化填料的价值就在于：它让我们能够自主定义亲和关系。
先说清楚：什么是预活化填料？
预活化填料可以理解为“已经预装好接口的填料”。Cytiva 的NHS、CNBr、Epoxy等预活化填料，已经在Sepharose等基架表面引入了可反应的活性基团。用户只需要加入自己的抗体、抗原、蛋白、肽段、酶、小分子或糖类配基，就可以通过共价偶联，把配基接到填料上。
以NHS-activated Sepharose为例，具体的偶联步骤如下：
第一步：洗去保存液
NHS活化填料通常保存在100%异丙醇中，以保护活性基团。使用前，用冷的1 mM HCl等溶液快速洗去异丙醇，尽量减少NHS活性酯水解。
第二步：加入配基进行偶联
将抗体、抗原、蛋白或肽段等含伯氨基配基溶解在偶联缓冲液中，室温下约15–30 min即可完成偶联，也可在4 ℃反应约4 h。
第三步：封闭剩余活性基团
偶联完成后，填料表面可能还有未反应的NHS基团。可用乙醇胺或Tris等试剂封闭，避免后续样品中的蛋白发生非特异反应。
第四步：交替洗涤，去除残留配基
最后用高pH和低pH缓冲液交替洗涤，去除未偶联或非特异吸附的配基。
Cytiva预活化填料的种类
NHS活化填料表面带有N-羟基琥珀酰亚胺活化酯。当配基上有伯氨基时，例如蛋白N端氨基、赖氨酸侧链ε-氨基，伯氨基会进攻NHS活化酯，NHS作为离去基团释放，最终在配基和填料之间形成稳定的酰胺键。因此，该填料很适合偶联抗体、抗原、蛋白和肽段等含氨基配基。
氰溴化物会活化琼脂糖基质上的羟基，生成可与配基中伯氨基反应的活性中间体。随后，蛋白配基上的氨基与活化基团反应，使配基共价连接到基架上。由于CNBr偶联常可实现蛋白配基的多点连接，因此比较适合较大蛋白配基的固定化，并有助于降低配基脱落。
Epoxy活化填料表面带有环氧基团。环氧基可以被多种亲核基团打开，例如配基中的羟基、氨基或巯基。反应后，配基会通过稳定的共价键连接到基架上。由于很多糖类和小分子都带有羟基，该填料特别适合糖类、小分子以及其他多官能团配基的固定化。
EAH Sepharose 4B是在 Sepharose 4B上通过环氧偶联方式接入1,6-二氨基己烷形成的介质，其特点是在填料表面带有游离氨基，并且这些氨基位于11原子亲水间隔臂的末端。它主要用于偶联含羧基的配基。在碳二亚胺的存在下，配基上的羧基可以与EAH Sepharose 4B表面的氨基发生偶联，形成稳定连接。
预活化填料的应用场景
- 案例一 基于EAH填料的草酸亲和捕获—垂钓肾结石中草酸结合蛋白
利用EAH-Sepharose 4B预活化填料上的氨基间隔臂，通过EDC碳二亚胺偶联反应把草酸固定到填料上，制备成“草酸亲和层析柱”，用于从复杂样品中捕获和分离草酸结合蛋白。用已知草酸结合蛋白p62和非相关蛋白碳酸酐酶进行验证。（00046 Piyachat Roop-ngam, 2010）
- 案例二 把Ulp1蛋白酶固定住，SUMO标签切割更省心
在重组蛋白表达中，SUMO标签经常用于提高蛋白可溶性，但后续去标签时往往需要加入游离Ulp1蛋白酶。游离酶用完后还要再去除，且不能便捷地重复使用。研究者将Ulp1蛋白酶固定化到NHS-activated Sepharose上，制备了一种可重复使用的固定化蛋白酶工具。
该研究显示，Ulp1在NHS-activated Sepharose上的固定化量约为1.68 mg/mL，固定化后仍保持约95%的底物切割能力，并显著提升了pH稳定性和热稳定性。
- 案例三 利用TNF-α的抗体片段作为配基纯化TNF-α
这篇文献中，研究者将抗TNF-α的scFv抗体偶联到CNBr预活化Sepharose 4B填料上，制备亲和层析柱，用于从LPS诱导的Raji细胞裂解液中捕获并纯化TNF-α。结果显示，洗脱产物在SDS-PAGE上呈现约17 kDa的目标条带，纯度可达95%以上，证明该预活化填料可用于快速、高效制备高纯度TNF-α。（Adv Pharm Bull. 2013;3(1):19-23）
当你问到：
“这个靶标没有现成亲和填料怎么办？”
Cytiva给了你一个肯定的答案：
那就把你的配基接上去，做一款独属于你自己研究所需的亲和介质。
教学课程
市场活动
资料下载
产品