同样是VB12，为什么供应商A和B颜色不同？

细胞培养基的外观特性一直被视为一项重要的关键质量属性（Critical Quality Attribute, CQA），然而，对于原材料及细胞培养基粉末的外观规范通常较为笼统，且具有较强的主观性。目前已有一些尝试致力于更好地标准化产品外观规范，例如USP<631>及欧洲药典（EP）2.2.2，为液体产品的颜色测定提供了基于分光光度法的指导^[1][2]。

为了进一步标准化细胞培养基及其相关原材料的颜色评估，我们采用色差仪（colorimeter）对粉末产品进行更为客观的评价。该方法使用稳定的光源和分光光度计，从光学吸收、反射及透射的角度对细胞培养基粉末和原材料的颜色进行定量表征。色差仪可输出光谱数据及对应的颜色参数，包括红–绿轴（a*）、黄–蓝轴（b*）和明暗轴（L*）。

在本研究中，我们对来自不同供应商、且具有不同粒径分布的维生素B12原料进行了颜色测定。基于这些颜色数据，建立了一个用于评估维生素B12原料对细胞培养基产品外观影响的模型。该模型通过使用不同来源维生素B12制备的培养基产品以及目视观察结果进行了验证，为评估原材料对细胞培养基外观的影响提供了分析框架。

维生素B

在Cytiva的标准原材料来料质量控制（QC）过程中，原材料的目视检查是一项常规要求。除目视检查外，还可利用光谱色差仪对原材料及细胞培养基产品的颜色特性进行分析。>色差仪可对样品进行光谱扫描，并输出样品在CIE色彩空间中的颜色参数（见图1）。

如图2所示，来自两个不同供应商（供应商A与供应商B）的维生素B12原料在外观颜色上存在明显差异。对这两种原料进行色差仪测定后，光谱数据证实，与供应商A的维生素B12相比，供应商B的维生素B12表现出明显的红移现象（图3）。

作为原材料风险评估的一部分，我们对这两种维生素B12原料进行了深入研究，以确定导致其颜色差异的物理和化学因素。

对来自供应商A和供应商B的多批次维生素B12原料进行了分析测试，包括紫外/可见光谱分析（UV/Vis，图4）、质子核磁共振（¹HNMR，图5）以及傅里叶变换红外光谱（FTIR，图6），以确定原材料的化学特性。

上述各项分析结果表明，供应商A与供应商B的维生素B12在化学结构上彼此一致，且均与经认证的参考标准一致。此外，进一步的细胞培养测试显示，所观察到的颜色差异不会对细胞培养过程或结果产生影响（数据未展示）。

然而，物理测试结果显示，两种维生素B12原料在粒径分布和晶体形态上存在显著差异（图7和图8）。通过粒径分析和显微镜观察发现，供应商A的维生素B12具有更小的粒径分布和更趋于非晶态的晶体结构，而供应商B的材料粒径较大、晶体形态更加规则。

为确定维生素B12粒径和浓度对成品培养基粉末外观的影响，我们开展了一项研究，在该研究中制备了一种简化的成品培养基产品，并使用不同浓度及不同粒径分布的维生素B12进行生产。

为控制维生素B12的粒径分布，采用不同目数的筛网对其进行筛分，从而分离出粒径范围从极小颗粒（<63 µm）到大颗粒（>180 µm）的不同颗粒群体。用于粒径分布处理的维生素B12原料均来源于供应商B。

最终成品培养基制备完成后，对样品进行CIE色彩参数（L*、a*、b*）测定，并采用最小二乘拟合模型分析维生素B1粒径和浓度对培养基颜色的影响（图 9）。

研究结果表明，维生素B12的粒径和浓度均会显著影响培养基颜色。随着维生素B12浓度的增加及粒径的减小，细胞培养基中红色和黄色的颜色贡献显著增强。此外，极小粒径的维生素B12结合较高的维生素B12浓度，还会使细胞培养基产品整体颜色加深（L*值降低）。

该模型可用于基于维生素B12的粒径分布及浓度，对简化成品培养基的外观颜色进行预测。由于不同供应商原材料的物理特性存在差异，该方法在原材料变更评估中具有实际应用价值。

• 供应商A的维生素B12原料在化学特性上与历史使用的供应商B原料以及维生素B12参考标准一致。
• 供应商A与供应商B原料之间观察到的外观差异，主要源于原材料粒径分布及晶体形态的不同。
• 表面响应分析结果表明，较小粒径的维生素B12会使产品颜色更深，并更加偏红、偏黄。
• 对来自供应商A和供应商B的维生素B12原料进行的物理和化学表征结果显示，两者均满足用于细胞培养基生产的全部原材料要求，适合实际生产使用。