快、准、稳：突破mRNA纯化瓶颈！ | 思拓凡学堂中国官网

mRNA技术正以持续加快的速度推动疫苗和治疗领域革新，随着全球市场持续扩张，从传染病到肿瘤治疗，mRNA的应用前景愈发广阔，个性化肿瘤疫苗（PCV）、in vivo CAR-T（mRNA-LNP路线）得到持续关注，mRNA在新冠疫情后迎来新的热潮。

随着临床管线推进，产业化需求日益增长，纯化作为下游关键工艺，正面临效率与质量的双重挑战。如何实现快速、高效、稳定的mRNA捕获，已经成为提升生产力的核心课题。

Cytiva Fibro dT，是一款基于静电纺丝纤维素基架的亲和层析介质，基于线性mRNA上带的polyA尾在适当的盐浓度下被Oligo dT配基补获的原理，可高效去除未成功加尾的mRNA前体、dsRNA、DNA、酶等杂质。

其主要特点有：

快：保留时间＜15 s，Cycle时长＜15 min，2000 nt mRNA的载量＞6 mg/ml

准：4300 nt mRNA载量比其它Oligo dT产品有2-4倍提升

稳：200-800 mM盐浓度范围内都有高载量，连续纯化20 cycles表现稳定

一起来看看Fibro dT的实战表现！

快

部分Oligo dT纯化产品的cycle时长长达60-100 min，载量＜2 mg/ml，这对于mRNA纯化过程中的稳定性是一个极大的挑战。Fibro dT的对流传质模式允许更高的流速，且在高流速下仍能确保mRNA与Oligo dT的充分接触，加上纤维结构可以加载更多的Oligo dT配基，因此可以大大缩短保留时间和提高载量。

图1使用Fibro dT Unit 0.4 ml（绿色）和另外两种Oligo dT亲和填料（蓝色和橙色）进行一条4300 nt的mRNA的纯化。实验结果表明，Fibro dT比其他亲和填料，可以更快的结合mRNA分子，10 s保留时间即可有较高的DBC_10%，并且有超其他亲和填料＞4倍的载量表现。以此对多条mRNA序列进行测试，每个测试cycle的时长（从平衡到CIP）均＜15 min，大大缩短了mRNA纯化时间周期。

图1：不同亲和填料的保留时间 – DBC10%数据

图2对比了Fibro dT Unit 0.4 ml（绿色）和另外两种Oligo dT亲和填料（蓝色和橙色）分别在200-800 mM盐浓度下的动态结合载量。图中A是1900 nt的mRNA样品，B是4300 nt的mRNA样品。

在200 mM的低盐浓度下，Fibro dT的动态结合载量是另外两种填料的2-4倍。高盐浓度下，Fibro对1900 nt短序列仍然保持有2-4倍的优势，对4300 nt的长序列甚至有＞4倍的载量优势。

图2：mRNA在不同盐浓度下的10%动态结合载量数据

准

由于基质不同，不同Oligo dT层析填料对长序列mRNA的捕获能力有很大的差异。Fibro dT开阔的流道设计，使得它对于长序列mRNA有更好的捕获效果。

图3展示了不同Oligo dT亲和填料对于不同长度mRNA纯化的动态结合载量。从图中可以看出，所有亲和填料的结合能力随着链长增加都有所下降，而得益于其开阔的流道，Fibro dT对≥4000 nt的长序列mRNA仍然有另外两款填料的2-4倍的动态结合载量。

图3：不同亲和填料对于不同长度mRNA的10%动态结合载量数据（mRNA 1，2，3，4分别为1900 nt，1900 nt，4300 nt，4000 nt，绿色为Fibro dT）

纯化后，mRNA 2(1900 nt)和mRNA 3(4300 nt)的纯化收率均大于90%，T7 RNA聚合酶残留降到＜2 pg/μg mRNA，dsRNA水平降到＜2.5 ng dsRNA/μg mRNA。Fibro dT在目标mRNA的精准捕获和杂质去除方面表现优异。

稳

无论对于研发工艺还是生产工艺，稳定性都是必须要考虑的重要因素，它直接影响生产线的安全余量设计以及终产品的稳定性、一致性、安全性。通过以下实验可以证明Fibro dT的稳定性。

图4使用同一个Fibro dT unit对同一批mRNA样品进行连续20 cycles纯化，取其中第1、5、10、15、20个cycle的谱图放在一起比较，所有运行曲线几乎重叠。

图5使用3个不同批次的Fibro dT unit分别进行20 cycles纯化，比较其中第1、5、10、15、20个cycle的mRNA收率，三个批次的Fibro dT unit的表现都是非常稳定的。

图4：用一个0.4 ml Fibro dT unit连续纯化20 cycles的稳定性，同时展示第1、5、10、15、20个cycle的谱图

图5：三个批次的Fibro dT unit连续纯化20 cycles的稳定性

✦技术验证，性能卓越✦

在mRNA纯化流程中，Fibro dT快、准、稳。

快：保留时间短、循环时间短、载量提升2-4倍，可以用更小的层析柱完成工艺从而节省成本和纯化时长；

准：精准捕获目的序列，长序列也能精准捕获，对杂质去除效果好；

稳：重复纯化稳定性高、批间一致性高，确保工艺及放大的可预见性。

实验数据充分证明，Fibro dT能实现高效、稳定、可重复mRNA纯化，为工艺开发与规模化生产提供坚实保障。