小规模蛋白如何快速纯化和筛选？

在《Biacore耗材选择保姆级攻略，一次配齐安心上机！（上）》中我们分享了芯片和固定方法的选择以及相关实验方案，本篇智荟专线小编将继续分享Biacore实验流程中所要用到的耗材试剂，包括运行缓冲液、再生试剂、维护试剂的选择。

• 高结合力：较高的比表面积便于富集和结合靶蛋白。
• 高重现性：易于并行处理和筛选蛋白，非粘附性磁珠消除了拖影效应和聚集体形成现象。
• 快速高效：从μL至mL规模样本中轻松捕获靶蛋白，仅需少量抗体，即可优化靶蛋白的富集或免疫沉淀能力。
• 简单灵活：针对电泳和质谱 (MS) 分析，从小样品量到大样品量的自动化方案和洗脱条件，确保检测快速且易于重复。

01Protein A Mag Sepharose & Protein G Mag Sepharose

• 快速经典实验方案 (Classic protocol) 最终目标蛋白将会与抗体一起被洗脱，适用于偶联抗体不干扰下游的分析，需要更快的实验处理的应用场景。
• 交联方案 (Crosslink protocol) 只有目标蛋白被洗脱，而抗体通过使用交联剂保持与基质的共价结合，适用于目的蛋白/抗原与抗体的重链或轻链具有相似的分子量，从而导致SDS-PAGE分析中的共迁移问题。

02Protein A Mag Sepharose Xtra & Protein G Mag Sepharose Xtra

相较于Protein A Mag Sepharose和Protein G Mag Sepharose磁珠，Xtra系列磁珠拥有更高的结合载量，＞27 mg human IgG/mL。更高的结合载量可以高效捕获抗体，并达到高产量和高纯度的要求。用于对血清和细胞上清液中的单克隆和多克隆抗体进行快速、小规模的纯化及筛选。

取300 μL Human IgG作为spiked in加入到大肠杆菌裂解液中，并使用磁珠纯化（图3）。进行6次平行试验，结果发现抗体回收率＞80%，SDS-PAGE结果分析显示，六次重复运行得到的纯度在90%以上 (RSD<2%) 。

03NHS Mag Sepharose

图4实验中使用小鼠单克隆抗体偶联NHS Mag Sepharose磁珠，并从血浆样品中富集纤溶酶原，实验结果可以看出，NHS Mag Sepharose相较于Protein A Mag Sepharose可实现更高水平目标蛋白纤溶酶原的富集。

04Streptavidin Mag Sepharose

05His Mag Sepharose Ni & His Mag Sepharose excel

His Mag Sepharose Ni磁珠，通过固相金属离子亲和层析 (IMAC) 快速小规模纯化和筛选来自不同来源的组氨酸标签蛋白质。His Mag Sepharose Excel磁珠同样基于IMAC，但镍离子非常牢固地结合至螯合配体上，因此可以耐受一定浓度的螯合剂（如0.1 mM EDTA），可用于直接捕获分泌到培养基中的表达蛋白，例如昆虫细胞或中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞等真核细胞分泌的蛋白，而无需进行过滤和浓缩。

为了验证His Mag Sepharose Excel磁珠纯化的灵活性，我们使用200 μL磁珠悬液纯化1 mL样本以及使用1 mL磁珠悬液纯化50 mL样本，将体系放大50倍，结果发现小规模纯化和大规模纯化的回收率和纯度相差不到10%，可实现不同体积样本的灵活纯化。

磁力架是磁珠纯化中的必不可少的，Cytiva可提供从1.5 mL至50 mL不同纯化体积大小的磁力架，灵活满足小规模蛋白纯化和样本富集不同实验需求。