磁珠揭秘第二弹！链霉亲和素磁珠知多少？

链霉亲和素磁珠简介

链霉亲和素磁珠是生物纳米磁珠的一种，表面官能团为链霉亲和素，可以特异性地结合生物素或生物素标记分子，进而分离生物素化分子。生物素-亲和素与标记试剂高亲和力的牢固结合及多级放大效应使其具有高度特异性和高度灵敏度的优势，因而被广泛应用于用于核酸检测、亲和纯化、免疫检测、细胞分离等领域。

链霉亲和素是与亲和素有类似生物学特性的一种蛋白质，与发现于蛋清中的亲和素不同，链霉亲和素起源于链霉菌属，是由Streptomyces avidin菌在培养过程中分泌的一种蛋白质产物，SA也可通过基因工程手段生产。一分子链霉亲和素结合四分子生物素，二者之间的相互作用是自然界已知最强的非共价结合力之一。链霉亲和素不含亲和素上的糖基侧链，等电点更接近中性，利于生物反应进行，故在检测中的灵敏度与特异性都高于亲和素，应用上更有优势。

此外还有一种比较特别的是中性亲和素磁珠，有着中性等电点以及去糖基化的特性，无RYD识别序列，因此意味着它的非特异性结合通常比亲和素和链霉亲和素低，并且对生物素结合蛋白保持最高的特异性活性。即中性亲和素磁珠具有最低的非特异性结合，且不会降低生物素亲和力。

图1：链霉亲和素磁珠结构

链霉亲和素磁珠的应用

01

化学发光

链霉亲和素磁珠使用非常简便，购入后经清洗、稀释，即成发光试剂的一组分。再与生物素化抗体混合构成固相捕获表面，即可捕获样本中目标物质。该体系的优点除前所述高亲和力及放大效应外，还在于生物素化抗体简单，且生物素分子小，与抗原/抗体偶联不会影响蛋白活性。现有市售的多种生物素化试剂选择，常用的是含NHS酯的生物素化分子，依赖的就是生物素的侧链可以衍生形成各种反应基团，从而与其他分子（携带氨基、羧基、巯基等）反应结合。

图2：链霉亲和素磁珠捕获目标物示意图

02

靶向捕获

靶向捕获测序是将靶标基因从整个基因组中分离、富集出来，然后使用高通量测序 (NGS) ，广泛应用于健康筛查、临床检测等，灵敏度非常高。目前靶向捕获测序主要是用液相捕获方法，携带生物素的探针与靶标区域互补杂交，然后结合到链霉亲和素磁珠上实现捕获，其他片段被洗脱掉，随后经变性将探针与目标片段分开，磁分离去除磁珠及结合在上的空探针，即完成目标区域的捕获。链霉亲和素磁珠是液相杂交捕获的重要原材料之一。

图3：NGS中杂交捕获步骤

03

免疫沉淀

免疫沉淀 (Immunoprecipitation, IP) 是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。将一种蛋白质视作抗原，利用已知的该蛋白的抗体将其从混合体系中沉淀分离下来，达到初步提取纯化的效果，是用来分离和检测特定蛋白质的一种方法。除了常见的Protein A磁珠或Protein G磁珠外，链霉亲和素磁珠也是一种选择，只需在免疫沉淀之前对抗体进行生物素化处理，再使用链霉亲和素磁珠进行分离纯化。与此同时，链霉亲和素磁珠适用于所有类型的Pull-down反应，尤其适用于无法和Protein A/G结合的抗体，因而被广泛应用于蛋白质组学应用的样品制备和检测开发中。此外，由于链霉亲和素磁珠的非特异性结合非常低，还可用于质谱分析中。

图4：使用链霉亲和素磁珠快速简便地制备样品

04

细胞分离

主要根据细胞所具有的特性将某种特定的细胞亚群从混合的细胞样品中分离出来的一种技术，在临床分析中，无论是组织活检还是抽血，细胞分离都是一个关键步骤，因为患者来源的样本产生由广泛的细胞类型、基质和生物因子组成的复杂混合物。目前基于磁珠的分析物捕获已成为细胞分离中一种普遍使用的方法，通过简单的磁性操作就能高度特异性地捕获目标细胞群，在此过程中，抗体首先被生物素化，磁珠通过链霉亲和素与生物素标记的抗体结合，实现与细胞表面相应抗原特异性结合而使细胞被磁珠间接捕获，从而达到分离。理想的磁珠不仅要便于细胞分离，还要与广泛的下游应用和分析相兼容。

图5：链霉亲和素磁珠细胞捕获示意图^[1]

Sera-Mag链霉亲和素磁珠

Sera-Mag链霉亲和素磁珠是Cytiva的特有磁珠品牌，在免疫分析和分子生物学领域具有广泛的应用，对生物素化靶分子表现出高亲和力和灵敏度，并具有快速反应动力学特性，从而提高通量和精度。Sera-Mag链霉亲和素磁珠对生物素有较高的结合能力，同时具有较低的非特异性结合。可提供以下四种类型：

常规单层磁的Sera-Mag链霉亲和素磁珠；

双层磁Sera-Mag SpeedBeads链霉亲和素磁珠；

非特异性结合更低的双层磁的Sera-Mag SpeedBeads链霉亲和素阻断磁珠；

双层磁的Sera-Mag SpeedBeads中性亲和素磁珠。

同时常规的Sera-Mag链霉亲和素磁珠又分为低、中、高等三种不同的生物结合能力，丰富的磁珠产品选择以满足您不同的应用需求。

表1：生物素结合能力不同的Sera-Mag链霉亲和素磁珠

Sera-Mag bead type	Biotin binding (pmol/mg bead)	Biotin-fluorescein binding (pmol/mg bead)	Biotin-IgG binding (µg/mg bead)
Sera-Mag Streptavidin (Low)	2500-3500	2979	40.6
Sera-Mag Streptavidin (Med)	3500-4500	4030	58.9
Sera-Mag Streptavidin (Ligh)	4500-5500	5163	63.9
Sera-Mag speedbeads Streptavidin (Med)	3500-4500	4261	77.7
Sera-Mag SpeedBeads Streptavidin-Blocked	3500-4500	3706	58.9

表2：订购信息

产品名称	规格	货号
Sera-Mag Streptavidin-Coated Magnetic Particles (low binding capacity) 结合能力2500-3500 pmol/mg	1ml	30152103011150
	5ml	30152103010150
	100ml	30152103010350
Sera-Mag Streptavidin-Coated Magnetic Particles (medium binding capacity) 结合能力3500-4500 pmol/mg	1ml	30152104011150
	5ml	30152104010150
	100ml	30152104010350
Sera-Mag Streptavidin-Coated Magnetic Particles (high binding capacity) 结合能力4500-5500 pmol/mg	1ml	30152105011150
	5ml	30152105010150
	100ml	30152105010350
Sera-Mag SpeedBeads Streptavidin-Coated Magnetic Particles 结合能力3500-4500 pmol/mg	1ml	66152104011150
	5ml	66152104010150
	100ml	66152104010350
Sera-Mag SpeedBeads Streptavidin-Blocked Magnetic Particles 结合能力3500-4500 pmol/mg	1ml	21152104011150
	5ml	21152104010150
	100ml	21152104010350
Sera-Mag SpeedBeads Neutravidin- Coated Magnetic Particles 结合能力3500-4500 pmol/mg	1ml	78152104011150
	5ml	78152104010150
	100ml	78152104010350