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询价手把手带你做实验｜实验前必看！ÄKTA层析实验前准备完整流程
在蛋白纯化、分离制备实验里，ÄKTA层析系统是公认的稳定可靠、精准高效，堪称实验室核心装备。
但很多人忽略一个真相：层析好不好，关键看准备。缓冲液、排气、装柱、管路…… 一步错，峰形变、回收率低、结果不重复，后面全“白忙”。
「手把手带你做实验」第一期，我们将把ÄKTA实验前全套准备一次性讲透，从开机到连接层析柱，step by step，新手也能零失误上手。
一、缓冲液&样品：先过滤再脱气，基础不能省
所有层析用的缓冲液及样品都需要用0.22 µm或0.45 µm的滤膜过滤，并对缓冲液进行脱气处理（如超声波脱气或者负压脱气）。
这一步直接决定：有没有气泡、基线稳不稳、压力会不会乱跳。
二、开机顺序别搞反：先开设备，后开软件
图1 设备与系统连接
三、系统排气泡：管路有气泡，层析柱易“损伤”！
ÄKTA常用两种排气方式：
1
自动泵洗（Pump wash）
- 把A1、B1等缓冲液管路放入去离子水
- 进入Manual→Execute Manual Instructions
- 选择Pumps→选择入口管路，Pump A wash / Pump B wash
- 选好入口Insert后，点Execute自动冲洗
图2 Pump wash界面
⚠️在系统进行Pump wash命令时需观察入口管道中是否有气泡、如有气泡是否再向前移动，或观察W1出口是否有液体流出。如发现管道中有较长段气泡无法排除或W1出口无液体流出，需要在Pump wash结束后对相应的入口进行泵头手动排气。
2
泵头手动排气（气泡顽固时用）
- 在泵头旋钮处接注射器
- 逆时针拧松旋转四分之三圈→缓慢抽气
- 看到管路完全充满液体无气泡即可停止
图3 手动排气
⚠️ 小提醒：
- A泵两个泵头都要依次排气，B泵、S泵同理
- 想对A2/B2管路进行排气，需先在Flow Path里切换入口
四、连接层析柱：压力+流向+安装柱子一步到位
层析柱装不好，极易引起压力报警、漏液、峰形变差等问题。
1
先设压力报警
- Manual→Execute Manual Instructions→Alarms
- 设置柱前压力&柱压差（按说明书填写或Column handling界面（如下图）查询，如0.5 MPa）
- 如无Alarm delta column pressure，则无需设置
图4 设置柱前压力报警
2
设置柱位&流向
- 有柱位阀：Flow Path→Column position（选择柱位）→Flow Direction复选框中选择流向一般选Down flow
- 如无柱位阀，无需设置
图5 设置柱位和流向
3
设流速并运行
Pumps→System flow设合适的流速（如0.3 mL/min）→Execute
4
正式接柱
- 液流稳定：在选定的柱位的A位置（如选择3号柱位则3A位置）连接PEEK管，等液体稳定流出
- 连接上柱头：PEEK管液液相接层析柱头上端，先不拧紧
- 拧紧上柱头接头：拧松层析柱下端堵头，将上柱头与连接管出口相连拧紧
- 连接下柱头：打开柱下端，连接在柱位阀3B接口上的管线相连或直接连接在柱位阀的3B接口上
- 固定层析柱：拧紧接头，确认不漏液后，用柱夹固定层析柱
- 如无柱位阀，将上样阀Col出口的管线按照前面描述的方式连接层析柱上端，紫外检测器连接的管线连接层析柱下端
- 层析柱连接后检查上下端均无液体溢出层析柱已经连接成功，使用柱夹固定层析柱即可
图6 柱位阀管线连接
5
收集器准备：收尾一步，准备完成
- 在收集器托盘按顺序放好收集管
- 点击软件停止按钮（如下图），结束当前运行
- 整套ÄKTA层析前准备工作完成
总结一句
ÄKTA想要做得顺，准备一定要做足。过滤脱气、正确开机、彻底排气、规范连接柱子，每一步都是实验成功的关键！
详细操作可见下方《ÄKTA系列超全应用培训手册》和层析柱使用前准备视频。
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