实验习惯新养成：层析柱的压力流速曲线一定要会测！

压力流速是层析填料的一个重要性质。在使用层析柱时，实验人员需要在ÄKTA上设置delta压力的报警压来保护层析填料，那么，填料的最大耐压从哪来？如何定义填料的最大耐压呢？

但是实际生产环境下，层析柱的运行条件和说明书的压力流速曲线可能会有很大不同，比如层析柱的直径/装柱高度/装填效果/溶液组成/样品状态等。简单的按照说明书提供的一个固定压力数字，往往不足以降低实际生产将来可能遇到的超压风险，甚至会给实验人员带来一个误解：只要设置好报警压，就会高枕无忧；而忽略了对层析柱压力流速的细致研究。

压力流速曲线实验

执行压力流速曲线测试实验的时候，将层析系统的入口放置在足量的水中，依次设置不同的流速水平（比如30-60-90-120-150-180-210-240-270-300 cm/h），每个流速的压力稳定后，记录一个“流速-对应的压力”实验点。

边记录，边作图，当压力流速曲线出现拐点，或者当设置某个流速水平，压力稳定所需的时间显著变长或者柱床开始出现水层，即说明填料的柱床开始不稳定，运行流速开始超出层析柱床的压力承受范围了，那么就可以停止测试。

稳健的操作流速或者压力应该位于压力流速曲线的线性区，并预留充足的安全空间，来抵抗未来可能发生的各种影响压力的因素，比如层析柱高度/直径，填料批间差，装柱质量，样品浓度/浊度变化，温度变化等等。

压力流速曲线在不同的实验背景下可以提供不同的信息。比如：

① 指导装柱：基于开放的压力流速曲线，可以找到拐点压力（即critical pressure），一般装柱压力在拐点压力的70-80%。该压力对应的装填因子（packing factor，PF）可以作为装柱参考。

② 指导操作：已经装填好的层析柱，测定柱效合格之后，可以再次使用水运行压力流速曲线。通过该曲线可以详细了解具体层析柱的压力流速的线性操作区间。此外，还可以使用具有较大压力风险的buffer溶液进行压力流速曲线测试，以观察真实溶液下，层析柱压力流速运行的真正线性区。

③ 层析柱的稳健性研究：在生产中，每次重新装柱后运行压力流速曲线实验，或者每次更换新的填料批号后运行压力流速曲线实验，积累的压力流速曲线在ÄKTA的UNICORN软件中进行重叠比对，可以从中分析层析柱的压力流速方面的长期稳定性是否良好。