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询价发文章必看！WB数据分析小能手来了
WB实验是什么？
WB实验又称Western Blot（蛋白质免疫印迹），通过抗原抗体杂交原理，使用一抗二抗杂交再最后通过显影检测蛋白质的表达量。WB是分子生物学、细胞生物学中检测特定蛋白质、半定量分析蛋白表达量的核心技术。也是分子生物学必需和最常见的实验。几乎生物类文献都提供了WB实验的数据支持。
WB实验数据是什么？
在一篇文献中WB实验一般通过条带图来体现。形式如下图所示。其中科学家们会分类分组对比不同药物处理和分组细胞系等条件设置对比，来检验蛋白条带表达的区域。一般至少设置一个对照组（Actin或者GAPDH内参蛋白检测）和一个实验组（目的蛋白）。
通过印迹杂交后调整各组实验内参蛋白的表达量（内参蛋白归一化）后，再对比各自表达量。如果检测相关蛋白信号通路如AKT磷酸化（P-AKT）的表达，还会额外增加AKT本底蛋白作为阴性对照组检测蛋白的磷酸化水平。
通过观察条带的宽度浓度来判断蛋白的含量和位置。其中必不可少的是进行蛋白条带原始TIF图（矢量图）的灰度值分析。可以形成显著性差异的柱状数据分析图（如下图）。从而从数据上真实检测和计算蛋白的相对表达含量。
多重荧光western blot法检测心肌组织损伤局部蛋白Troponin c/l
发文章对WB数据的要求？此处核心干货，敲小黑板记笔记！！
- 数据清晰，文件不小于300个DPI
- 需要进行灰度值精准定量数据分析（不可仅凭肉眼观察）
- 提供原始文件TIF原图（8 bit—16 bit（最通用版本）—-24 bit）
- 尽可能整张膜进行显影（膜拼接）
- 过曝数据不能使用（红色/紫红色区域）
- 不建议同一批实验更换条件（ECL/成像仪）减少误差
- 磷酸化等高灵敏实验可建议使用荧光成像
- gamma调节必须不能动！为1！
- 蛋白条带浓度分析不能使用图片格式（jpeg/bmp）及与marker叠加图，需使用单个wb条带原始TIF（矢量图）源文件
- 需进行内参蛋白归一化或者总蛋白归一化计算
- 蛋白条带及峰图面积积分注意一定要进行背景去除！（去除噪音和背景干扰）
使用什么工具进行WB数据分析？
建议使用专业的图像分析软件进行数据处理。如imageJ，ImageQuant TL analysis software（IQTL）等官方认可科研分析软件进行图像分析。
如果使用第三方软件如PS，美图秀秀等可能会导致原始TIF如bit 16 TIF （0-65535灰阶）被压缩到bmp格式（ 0-255）灰阶，数据会被丢失或者失真，造成条带边缘信息模糊等。
标准的wb数据分析步骤
- 泳道划分
- 背景去除（根据阈值）
- 条带划分（根据峰图）
- MW分子量计算（可选）
- 归一化计算（可选）
- Quant定量计算（可选）
- 结果读取和数据输出
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