Biacore实验指南（二）| 抗体筛选类实验，这么做更高效！

用户

工程师您好，最近我们做细胞株开发，好多抗体上清要筛选呀。忙了一整天，传统检测方式太慢了，前后结果还容易对不上！太崩溃了╭(╯^╰)╮

用户

Biacore能做高通量上清筛选么？效率怎么样？

工程师

Biacore适用于抗体开发的各个环节，譬如早期的浓度定量、亲和力排序、特异性分析等，中期的动力学表征、后期的质控放行、基于药品质量标准分析方法指导原则的验证方法开发等，均有成熟的应用案例及操作指南呢！

用户

太好啦！您能否详细介绍下筛选这一块的内容？

工程师

没问题，这就为您奉上 ☟

Biacore抗体筛选类实验指南

在寻找治疗性或分析性抗体时，具有适当的动力学/亲和力、特异性和理化性质对于抗体是非常关键的。抗体筛选的目的是通过多维度选择，确定产生适合目的的抗体的细胞克隆。样品基质通常是复杂的，如杂交瘤培养上清或噬菌体展示制剂。在筛选过程的早期，获得动力学信息通常会提高实验效率，也能加快抗体开发的进度。一般需要的指标包括：特异性 (Specificity) 、结合动力学/亲和力(Binding characteristics) 、表达水平 (Expression level) 。

值得注意的是，使用Biacore，可以对抗体的特异性 (Specificity) 、结合动力学/亲和力 (Binding characteristics) 、表达水平 (Expression level) 进行“三合一”的表征筛选。其中较为常用的方式便是捕获法，采用商品化的或制备可抓取抗体的捕获芯片、先抓上清中的抗体然后再流过特定浓度的抗原，随后通过再生清洗掉芯片表面的抗体及抗原，从而达到重复使用的效果。

图1：捕获法的实验流程图

基于图1中的实验流程示意图，我们可以用以下3种方法进行筛选排序：

1

报告点筛选法：基于捕获抗体的Capture level数值，可以判断待筛选上清中的抗体表达量的水平；基于抗原上样后的Binding level数值，可以判断当前Cycle的捕获抗体是否能特异性识别抗原及抗原结合活性

2

解离速率筛选法：基于抗原解离段K_off的情况，评价抗原抗体复合物的稳定性，从而筛选出需要的抗体

3

动力学筛选法：基于抗原结合、解离的情况，得出K_on-K_off图，多维度对抗体进行筛选

实验方案及更多参数细节

表1：捕获法进行抗体筛选的实验方案

具体的实验条件及参数可依据实际需求进行选择，表2、3分别是从报告点或者是解离速率/动力学参数进行抗体上清筛选的参数细节，适用于Biacore所有机型。

表2：报告点筛选法的实验参数细节

表3：解离速率/动力学参数进行筛选法的实验参数细节

参考以上信息，编辑好实验方法，即可参考软件上的板布局准备样本进行对应的检测。实验结束后，直接使用自带的数据分析软件进行多维度的高通量分析。Biacore采用的全持续流检测技术，抗原抗体互作的信息都被全程记录，所以可以参考表4采集不同时间点的信号值，进行抗体筛选。

表4：建议关注的数据采集点

Biacore Insight software支持各类图谱格式的输出，不同的数据值可以依照实验需求进行排列展示，例如图2便展示了捕获法进行抗体上清筛选的原始数据图及各个Cycle的Capture level情况，图片中的Capture level与待筛选抗体的表达量呈正相关关系。

图2：如何测定待筛选抗体的表达情况

Stability_early/ Stability_late也是常用的筛选指标之一，也常用于抗原抗体结合水平高低的分析过程。例如图3，通过Stability early Vs. Capture level图、Stability late Vs. Stability early图，可以将待筛选的抗体上清进行有效分区，筛选出表达量高、抗原结合水平高的抗体上清。

图3：如何筛选出表达量高、抗原结合水平高的抗体上清

除了以上的筛选维度，抗体的动力学参数（Kon、Koff）也很关键，对筛选优质抗体具有很强的参考意义。如图4，便是Koff screen的结果示意图，基于此结果，便可以挑选出慢解离的抗体上清，进行进一步的分析。

图4：Koff screen结果示意图

此外，也可以直接在数据分析软件上生成Kon-Koff图，如图5，将待筛选的抗体上清与特定抗原的动力学参数一览无余，挑选出最为理想的抗体上清。

图5：Kon-Koff screen结果示意图