NICK 层析柱用于纯化切口平移 DNA 片段以及从未结合标记核苷酸中分离任何标记探针。
NICK 层析柱可立即使用，在重力流作用下运行。试验表明，在切口平移混合物中应用的至少 97% 的放射性洗脱为两个分离清晰的峰，分别对应于标记 DNA 分子和未结合核苷酸。至少回收了 90% 的应用 DNA，然后这些 DNA 可用于 DNA 杂交方案。最大样本体积为 100 μL。
切口平移技术使用 DNA 聚合酶 I 将 DNA 序列的某些核苷酸替换为其标记类似物，从而创建可用作荧光原位杂交 (FISH) 或印迹技术中探针的标记 DNA 序列。该技术也可用于 Southern 印迹等技术中的放射性标记。
这一过程称为切口平移是因为使用 DNase 处理要标记的 DNA 以产生单链”切口”。随后用 DNA 聚合酶 I 替换切口位点，从而延伸 3′ 末端，通过 5′-3′ 核酸外切酶活性去除核苷酸，并将其替换为 dNTP。为标记用作探针的 DNA 片段，对反应中提供的结合核苷酸之一进行放射性标记，或者可以连接荧光基团代替荧光标记，或者将其用作免疫检测的抗原。
Sephadex G-50 DNA 级填料应用广泛，包括对 DNA 进行脱盐、更换缓冲液和从末端标记的寡核苷酸中去除未结合的核苷酸。Sephadex G-50 可填充至空微量离心柱中，以用于这些应用。
有五种不同的 G 类型，包括用于小分子的 G-10 再到用于大分子的 G-75，Sephadex G-50 是其中之一。Sephadex G-50 是一种性能良好的凝胶过滤填料，用于对分子量 > 30000 的生物分子进行脱盐和更换缓冲液，通过离心方案可对长度大于 20 个碱基的分子进行 DNA 和寡核苷酸纯化。或者，可以使用 Sephadex G-25。Sephadex G-25 的排阻极限约为 Mr 5,000，这意味着通过离心方案其可用于任何长度大于 10 个碱基的 DNA。
因此，两种类型的 Sephadex 均非常适用于在合成后或放射性标记中纯化寡核苷酸或非常小的 DNA 片段。
收藏
询价
