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用于去除 GST 标签的 PreScission 蛋白酶

PreScission 蛋白酶
PreScission 蛋白酶是人鼻病毒 (HRV) 3C 蛋白酶和 GST 的融合蛋白。可一步完成 GST 标签的层析柱上裂解和蛋白纯化。
 

PreScission 蛋白酶
应用 用于将 GST 标签与使用 pGEX-6P 载体表达的蛋白进行位点特异性分离
酶切缓冲液 50 mM Tris-HCl、150 mM NaCl、1 mM 乙二胺四乙酸 (EDTA)、1 mM 二硫苏糖醇 (DTT)、pH 7.0
洗脱缓冲液 50 mM Tris-HCl、10 mM 还原型谷胱甘肽、pH 8.0
抑制剂 100 mM ZnCl2(<50% 抑制率);100 µM 糜蛋白酶抑制素;4 mM Pefabloc
分子量 (Mr) 46000
供应方式 2000 单位/ml(833 ~ 1000 单位/mg)的 50 mM Tris-HCl (pH 8.0)、150 mM NaCl、10 mM 乙二胺四乙酸、1 mM DTT 和 20% 甘油溶液。
单位定义 温度为 5°C、pH 为 7.0 的条件下培养 16 h,一个单位的酶对 100 µg 测试用 GST 融合蛋白(50 mM Tris-HCl、150 mM NaCl、1 mM 乙二胺四乙酸 (EDTA)、1 mM DTT 溶液)的裂解度达到 90% 以上。
载体 pGEX-6P-1、pGEX-6P-2、pGEX-6P-3
包装规格 500 个单位
PreScission 蛋白酶是人鼻病毒 (HRV) 3C 蛋白酶和 GST 的融合蛋白。可一步完成 GST 标签的层析柱上裂解和蛋白纯化。
  • 识别 LeuGluValLeuPheGln/GlyPro 序列并在Gln 残基与 Gly 残基之间进行特异性酶切。
  • 省时——可以酶切 GST 标签蛋白,同时仍与亲和层析填料结合。
  • 孵育温度低——能够低温酶切包含 HRV 3C 蛋白酶识别序列的融合蛋白。

层析柱上或层析柱外酶裂解

当融合蛋白仍与 Glutathione Sepharose 4B、Glutathione Sepharose High Performance 或 Glutathione Sepharose 4 Fast Flow 亲和层析填料结合时,只需一步即可去除 GST 标签和蛋白酶。另一个选择是使用还原型谷胱甘肽洗脱带 GST 标签的蛋白质,裂解,然后使样品通过相同的层析填料以去除蛋白酶和标签。

与其他常规蛋白酶(例如凝血酶和 Xa 因子)不同,这种带 GST 标签的融合蛋白可以通过结合对 GST 具有亲和力的层析填料而轻松去除。其他非重组蛋白质酶需要使用不同的层析填料进行额外的纯化步骤。

编码 HRV 3C 蛋白酶识别序列的载体

pGEX-6P 载体 pGEX-6P-1、pGEX-6P-2 和 pGEX-6P-3 编码此 3C 蛋白酶的识别序列。

成功用于已发表研究

PreScission 蛋白酶在多种研究应用中用于执行酶切,包括:

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