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CD34+ HSC LNP 试剂盒是一种经过优化的 LNP 试剂混合物，可用于将 mRNA 或 Cas9 mRNA/sgRNA 递送至 CD34+ HSC。使用该试剂，研究人员能够在发现和临床前阶段建立临床相关的可放大方法，用于体外基因递送和编辑。
CD34+ HSC LNP 试剂盒具有以下优点：
- 经过优化的 LNP 制剂：使用经过优化的专有 LNP 制剂以高转染效率递送 RNA*
- 高敲除效率：实现剂量依赖性高效率基因敲低和蛋白表达。
- 高细胞产量和分化潜力：编辑后维持高细胞活力、产量和分化潜力。
- 从发现阶段扩大到临床前阶段：使用 NanoAssemblr™ 平台将离体细胞治疗研究从发现阶段扩大到临床前阶段。
- 经验证的工作流程：使用 CD34+ HSC 细胞生产工作流程进行优化和验证。
*这种试剂盒仅供研究使用，其中的 LNP 组成包括可获得许可用于未来临床评价的可电离脂质辅料。
流程易于并入标准 CD34+ HSC 细胞培养方案中
CD34+ HSC LNP 试剂盒易于并入 CD34+ HSC 工作流程中，可用于基于 mRNA 的基因表达和 CRISPR/Cas 基因编辑应用。一般工作流程概述如下。
LNP 处理和 HSC 细胞培养工作流程示意图。LNP 生产可与细胞培养工作流程分离，从而增加工作流程的灵活性和简单性。
CD45 的剂量依赖性基因敲除
在 NanoAssemblr™ Spark™ 系统中使用 CD34+ HSC LNP 试剂盒 (100 µL) 和在 NanoAssemblr™ Ignite™ 仪器中使用 CD34+ HSC LNP 试剂盒 (2 mL)，对来源于人脐血和人动员外周血的 CD34+ HSC 进行剂量依赖性高效基因组编辑。
A) NanoAssmblr™ Spark™ 仪器上产生的 CRISPR-Cas9 mRNA 和 sgRNA LNP 的 CD45 剂量反应。B) 相应细胞活力。C) 未经处理和经 CRISPR RNA-LNP 处理的 CFU 平板展示图片。D) 未经处理 (UT) 样品、空白 LNP 处理样品和经 CRISPR RNA-LNP 处理样品的标准化红系和髓系集落的产量。
经 LNP 处理后的细胞增殖和活力
经 LNP 处理的 HSC 显示出较高的细胞增殖和活力水平。
A) 细胞增殖和 B) 在 LNP 介导、靶向 CD45 经 CRISPR RNA-LNP 处理的 HSC 基因编辑后，对细胞存活能力超过 1 周的监测C) 通过流式细胞术分析 CD45 表面表达，对比 n = 2 个供体中 LNP 介导的基因编辑效果 D) 相应的直方图。
经 LNP 处理后 HSC 的冷冻保存与冻融处理
经 LNP 处理的 HSC 在冷冻保存条件下显示出较高细胞活力和产量。此外，细胞在保持 CD45 敲除效率的同时，保留了其可植入的 HSC 表型分布。
LNP 介导的 CRISPR Cas9 基因编辑后 HSC 的冷冻保存。A) HSC 冻融循环 (F/T) 的示意图。B) 经 LNP 处理后，在冷冻的 24 或 48 小时的时间点，评估解冻后或非冷冻状态下长期再增殖的 HSC 表型水平。C) 经 LNP 处理 24 小时后，在 F/T 循环下的细胞活力和活细胞恢复比率。D) 在总活细胞和可植入的表型 (CD34+ CD38- CD90+ CD133+) 的冻融和新鲜的经 LNP 处理 HSC 中，观察到的 CD45 敲除效率。
细胞培养和 RNA-LNP 生产的规模扩大
CD34+ HSC LNP 试剂盒可用于 NanoAssemblr™ Spark™ 和 NanoAssemblr™ Ignite™ 仪器。还可通过 BioPharma Services 对试剂进行规模扩大工艺开发和 GMP 生产。
CD34+ HSC LNP 试剂盒可与 NanoAssemblr™ 平台相结合，可在 Spark™ 和 Ignite™ 仪器上实现可靠和等效的表现，并提供从发现到临床前研究的无缝可放大性。
A) CD45 敲除和 B) CD33 敲除（总活细胞群），以及 C) 相应的细胞活力。A-C 包括 >20 项使用 >4 个独特供体的独特实验。D) 对未经处理、空 LNP 和装载 CRISPR-Cas9 RNA 的经 LNP 处理 HSC，使用自动细胞计数器评估了其增殖情况。E) 使用一个自动 CFU 计数器、5 项使用 Spark™ 的独立实验和 2 项使用 Ignite™ 仪器的独立实验评估未处理、空 LNP 和装载 CRISPR-Cas9 RNA 的经 LNP 处理 HSC 的克隆源性。
试剂盒组分
| CD34+ HSC LNP 试剂盒，100 µL（产品编号 1003000） | CD34+ HSC LNP 试剂盒，100 µL，带芯片（产品编号 1004000） | CD34+ HSC LNP 试剂盒，2 mL（产品编号 105000） | |
|---|---|---|---|
| 脂质混合物 | 100 µL | 100 µL | 2 mL |
| 制剂缓冲液 1 型 | 400 µL | 400 µL | 1.6 mL |
| 稀释缓冲液 1 型 | 1.5 mL | 1.5 mL | 100 mL (10X) |
| 冷冻保存缓冲液 2 型 | – | – | 6 mL |
| 载脂蛋白-E3 (ApoE3) | 100 µg | 100 µg | 500 do |
| Spark™ 芯片 | – | 5 | – |
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