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Amersham Rediprime II DNA 标记系统

提供独立分装的反应混合物,在加入稳定剂和染料后进行干燥,使用户更容易标记探针。

Rediprime II DNA 标记系统
应用 标记各种来源的 DNA,获得高比放活性,用于 Southern 和 Northern 印迹杂交
套件组成 干燥、稳定形式的标记反应缓冲溶液(dATP、dGTP、dTTP、无核酸外切酶活性的 Klenow 酶和随机引物);干燥、稳定形式的对照 DNA (300 ng λ Hind III DNA),1 管
储存条件 2 – 25°C
核苷酸 dCTP
标记时间 10 min
探针比活性 >109 dpm/μg
稳定性 在推荐条件下最长可稳定存放 6 个月
试验次数 30 反应

Rediprime II DNA 标记系统提供独立分装的反应混合物,在加入稳定剂和染料后进行干燥,使用户更容易标记探针。Rediprime 反应混合物使用改良的无核酸外切酶活性的 Klenow 制备,可在 37°C 下与大部分 DNA 底物孵育 10 分钟后得到比放活性为 1.9 × 109 dpm/μg 或更高的探针。用放射性标记等价物替换反应混合物中的非放射性核苷酸,使新合成的 DNA 具有放射性。可标记非常少量的目标 DNA,因此添加比较少量的核苷酸即可获得比放活性非常高的探针。然后,可将这些放射性标记片段用作灵敏的杂交探针,满足过滤器应用的需求。

  • 保质期长,简单快速。
  • 在环境温度下可保持稳定的预混合反应体系,带有颜色测试卡,可通过标记 DNA 获得 > 10⁹ dpm/μg 的比放活性。
  • 杂交前无需去除未掺入的核苷酸。
  • DNA 可以在溶液中或存在低熔点琼脂糖的情况下进行标记。
  • 标记反应在 10 分钟内完成。

Rediprime II 包含预混合、独立分装的随机引物反应体系,冷冻干燥以保持在环境中的稳定性。只需添加底物和 [α- 32 P]dCTP。底物 DNA 用量低至 25 ng。仅适用 dCTP 使用。每个系统包含以下试剂,足以进行 30 或 60 次反应(具体取决于订购的产品):预混合、预分装试管(含 30 份标记混合物和对照 DNA)。

Feinberg 和 Vogelstein 使用了随机序列六核苷酸,沿变性模板 DNA 的多个位点引发 DNA 合成。引物-模板复合物是 DNA 聚合酶 I Klenow 片段的底物。用放射性标记等价物替换反应混合物中的非放射性核苷酸,使新合成的 DNA 具有放射性。可标记非常少量的目标 DNA,因此添加比较少量的核苷酸即可获得比放活性非常高的探针。然后,可将这些放射性标记片段用作灵敏的杂交探针,满足过滤器应用的需求。

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主讲嘉宾:张思敏

课程分类:线上产品课程 – 层析

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